产品介绍

KEL转染试剂操作手册

1. 产品规格  

KEL有两款转染试剂，一款是通用型试剂可以转染DNA质粒和RNA的。另一款是专门转染RNA的。两款试剂都是纳米粒子材料。与其它转染试剂相比，KEL转染试剂具有毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

3. 应用范围

KEL转染试剂适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的转染，瞬时转染和稳定转染，可用于多种贴壁细胞以及悬浮细胞系，特别适用于各种常规细胞如293，293T，COS7，A549，hela等细胞，均能得到较高的转染效率，且重复性好。

4. KEL-DR Transfection Reagent是通用型转染试剂，转染DNA质粒实验步骤如下：

DNA转染流程

下列步骤适以24孔板为例，所有试剂用量和体积均是按孔计算。

1. 贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2.0×10⁵个细胞接种于500 µL含抗生素的培养基中，转染时细胞长至50%融合最佳。

2. 转染复合物的制备

A将KEL-DR Transfection Reagent转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀;

B在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加2ul转染试剂，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;

C在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM，并添加0.5ug DNA质粒，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;

D将KEL-DR Transfection Reagent培养基混合物滴加至DNA质粒培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15~20 min后，立即转染。

3. 在每孔细胞中加入100µL转染复合物，轻轻摇匀。

4. 转染6-8小时后可更换完全培养基。

5. 37℃培养24-72小时可检测mRNA表达，48-96小时检测蛋白表达。

5. KEL-R Transfection Reagent是RNA专用型转染试剂，转染siRNA实验步骤如下：

siRNA转染流程

下列步骤以24孔板为例，所有试剂用量和体积均是按每孔计算。

1.贴壁细胞：转染前一日，每孔0.5-2.0×10⁵个细胞接种于500 µL含抗生素的培养基中，转染时细胞长至60%~80%融合最佳。

    2. 转染复合物的制备

    A将KEL-R Transfection Reagent转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀;

B在无菌管中加入50 ul无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加2ul转染试剂，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;

C在另一无菌管中加入50 ul无血清培养基或OPTI-MEM，并添加2ul siRNA，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min;

D将KEL-R Transfection Reagent培养基混合物滴加至siRNA培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15~20 min后，立即转染。

注：siRNA一般推荐20uM浓度保存, 2ul总量是40pmol。

3. 在每孔细胞中加入100ul转染复合物，轻轻摇匀。

4. 转染6-8小时后可更换成完全培养基。

5. 37℃培养24-72小时检测mRNA表达，48-96小时检测蛋白表达。

 5. 转染效率低影响因素

7. 产品储存

KEL转染试剂可在室温下运输，到货后4°C可保存2年，本产品已滤菌，使用前轻轻摇匀。

冬季寒冷，如果出现结冻的现象，要将本产品恢复至室温后使用。

8. 注意本转染试剂不能用于人体实验。