产品介绍

货号：KC112-1.5   

规格：1.5mL

1. 产品描述

KEL有两款转染试剂，一款是通用型试剂可以转染DNA质粒和RNA的。另一款是专门转染RNA的。两款试剂都是纳米粒子材料。与其它转染试剂相比，KEL转染试剂具有不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

2. 应用范围

KEL转染试剂适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的转染，瞬时转染和稳定转染，可用于多种贴壁细胞以及悬浮细胞系，特别适用于各种常规细胞如293，293T，COS7，A549，hela等细胞，均能得到较高的转染效率，且重复性好。

3. KEL-DR Transfection Reagent是通用型转染试剂，转染DNA质粒实验步骤如下：

DNA转染流程

下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的KEL-DR Transfection Reagent(µL)与DNA(µg)的比值为1:1到3:1，转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。

1. 贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2.0×105个细胞接种于500 µL不含抗生素的培养基中，在转染时细胞可长至60%~80%融合。

2. 转染液制备，每孔细胞用量如下：

A．用50ul Opti-MEM培养基稀释质粒DNA，轻轻混匀。

B．使用前轻轻摇匀KEL-DR Transfection Reagent，然后按比例取适量KEL-DR Transfection Reagent在50µL Opti-MEM培养基中稀释，室温孵育5分钟。注意：请在25分钟内进行下一步操作。

C．将前两步所稀释的DNA和KEL-DR Transfection Reagent混合（使总体积为100µL），轻轻混匀，室温放置20分钟（溶液可能出现浑浊）。注意：转染复合物常温下可在6小时内保持稳定。

3. 在每孔细胞中加入100µL转染液，轻轻摇匀。

4. 37℃培养24-48小时后检测基因表达，转染6-8小时后可更换培养基。

5. 对于稳定转染，在转染24小时后以1:10稀释接种于新鲜培养基中，第二天可加入选择培养基。

   优化DNA转染

    可通过改变细胞密度、质粒DNA密度和KEL-DR Transfection Reagent浓度以优化转染。要保证细胞融合在80%以上，KEL-DR Transfection Reagent(µL):DNA (µg)可以在1:1或3:1之间调整。

5.  KEL-R Transfection Reagent是RNA专用型转染试剂，转染siRNA实验步骤如下：

siRNA转染流程

下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，所有数量和体积均是按每孔计算。

1. 转染前一日，将细胞接种于500ul不含抗生素的培养基中，使其在转染时长至70-80%融合。

2. 转染液制备，每孔细胞用量如下：

A. 用50ul Opti-MEI培养基（可含血清培养基）稀释20 pmol  siRNA（转染时siRNA终浓度位20uM），轻轻混匀。

B. 使用前轻轻摇匀KEL-R，然后取1ul  KEL-R Transfection Reagent在50ul    Opti-MEI培养基中稀释，室温孵育5分钟。注意：请在25分钟内进行下一步操作。

C. 将前两步所稀释的siRNA和KEL-R Transfection Reagent混合（使总体积为100ul），轻轻混匀，室温放置20分钟（溶液可出现浑浊）。

3. 在每孔细胞中加入100ul转染液，轻轻摇匀。

37℃培养24-96小时后检测基因表达，转染6-8小时后可更换培养基。

siRNA转染优化

      可调整siRNA与KEL-R Transfection Reagent的用量以优化转染，在24孔板，siRNA可在10-50pmol之间调整，KEL-R Transfection Reagent可在0.5-2.0ul之间调整，在增加细胞密度时也应优化转染剂量

6. 其他影响因素

7. 产品储存

KEL转染试剂可在室温下运输，到货后4°C可保存1年，本产品已滤菌，使用前轻轻摇匀。

冬季寒冷，如果出现结冻的现象，要将本产品恢复至室温后使用。

8. 注意本转染试剂不能用于人体实验。