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慢病毒LV使用说明
目录
交付 02
运输 02
保存与处理 02
安全须知 02
体外应用 03
贴壁细胞感染 04
悬浮细胞感染 05
注意：初次使用者请务必认真阅读该说明后再进行相关操作！
交付
| 定制服务内容 | 交付周期 | 交付内容 | 交付规格 |
LV小量定制 ( 总量 1×108 TU，滴度 ≥1×108 TU/ml) | 3周左右 | LV 病毒和质检报告 | 50μl/ 管 |
LV中量定制 ( 总量 5×108 TU，滴度 ≥1×108 TU/ml) | 3周左右 | LV 病毒和质检报告 | 50μl/ 管 |
LV中量定制 ( 总量 1×109 TU，滴度 ≥1×109 TU/ml) | 3周左右 | LV 病毒和质检报告 | 50μl/ 管 |
运输：
交付的 LV 病毒将存储在 PBS 缓冲液中，并采用干冰运输。收到病毒后，如遇到包装破损等 问题，请及时与我们的工作人员联系。
保存与处理：
收到病毒后，如实际使用量较少，可将病毒小量分装（请用 DNase/RNase-Free 无菌耗 材进行分装，并用封口膜进行封口保存）。放置于 -80℃保存，可保存约一年；-20℃可保存 2-3 周；4℃可保存 1-2 周。病毒保存一年后，请进行滴度检测后再使用。
2. 病毒可用无菌 PBS 或无菌生理盐水进行稀释，请尽量按照实际使用量现稀释现用。
3. 病毒使用前，请冰浴融化，并在整个实验过程中将病毒置于冰上操作。未使用完毕若存放 于 4℃，请尽量在一周内用完。
注意：请避免反复冻融，否则将会导致病毒滴度显著下降。
安全须知：
1. 病毒使用前，操作人员应当充分了解病毒相关实验安全问题，加强安全操作意识。在实验 操作中，请务必穿戴好实验服、口罩、护目镜以及一次性手套。
2. 建议按照 BSL-2（Biosafety Level-2，生物安全防护二级水平）规范在 Class II 生物安 全柜中进行病毒操作（如在超净工作台中进行操作，请勿打开排风机，避免病毒与外界环境 接触）。
3. 病毒操作时，请注意避免蛋白酶或细菌污染，请使用 DNase/RNase-Free 耗材进行操作。
4. 若眼睛、皮肤等不小心接触到病毒，请立即用大量清水冲洗；若病毒接触到伤口等部位， 请立即用 10% 碘伏溶液擦洗之后，用大量清水冲洗，冲洗时间建议至少 20min。
5. 实验结束后，请用新配制的 1% 的次氯酸钠溶液消杀病毒至少 20min；也可采用 2% 的戊 二醛溶液或 0.25% 的 SDS 溶液进行消杀处理，还可采用高温高压（121℃，1h）消杀措施。
6. 实验结束后，请及时用大量肥皂水清洁双手。所有生物废料的处理均需遵从公共机构发布 的和所处机构制定的规范条例执行。
体外应用：
病毒滴度 (Titer) 是指单位体积病毒液具有活性的病毒单位数量，是衡量病毒质量的核心指 标。LV 滴度单位是 TU（转导单位，transducing-units）/ml。 感染复数（Multiplicity of infection，MOI）是指感染时病毒和细胞数量的比值，即 MOI =（病毒滴度 x 病毒体积）/ 细胞数目。细胞最适 MOI 是指在实验中将某种细胞感染达 到 80% 时的 MOI。对于 LV，MOI 单位是 TU/cell。
首次使用慢病毒者，建议设置梯度预实验，事先摸索好病毒感染细胞的最佳感染条件（例最佳 MOI 等）。
慢病毒使用说明：
1、细胞接种 按照表格推荐细胞接种体积，将状态良好的细胞计数后，在对应细胞培养容器中接种一定量 细胞，放入细胞培养箱中培养 16-24h 至细胞汇合度为 60-80%，即细胞铺板。
2. 病毒感染 根据预实验结果，选择合适 MOI 值和感染条件，往细胞培养体系中加入对应量的病毒（为 增加病毒与细胞的接触几率，可适当减少感染时培养基的体积），随后放入细胞培养箱中进 行感染。
3. 换液 12h-20h 后观察细胞状态，按需更换新鲜培养基（建议 8h 后观察一下细胞状态，如细胞状 态不好，可提前换液，保持细胞的正常生长状态。），换液间隔不宜超过 24h。
4. 检测感染效率 感染细胞 48h-72h 后，在荧光显微镜下观察荧光蛋白表达，检测病毒感染效率。
| 细胞培养容器 | 单孔底面积 | 接种体积 | 细胞数目 |
| 96 孔板 | 0.3cm2 | 100μl | ~1X104 |
| 48 孔板 | 0.6cm2 | 200μl | ~2X104 |
| 24 孔板 | 2cm2 | 500μl | ~5X104 |
| 12 孔板 | 4cm2 | 1ml | ~1X105 |
| 6 孔板 | 10cm2 | 2ml | ~2X105 |
| T25 瓶 | 25cm2 | 5ml | ~5X105 |
悬浮细胞感染：
1. 细胞接种 按照表格推荐细胞接种体积，将状态良好的细胞接种至对应细胞培养容器中。
2. 病毒感染 根据预实验结果，选择合适 MOI 值（一般为 10-100）和感染条件，往细胞培养体系中加入 对应量的病毒（为增加病毒与细胞接触的几率，可适当减少感染时培养基的体积），随后放 入细胞培养箱中进行感染。
3. 离心换液 12h-20h 后，将各孔细胞收集到干净的 EP 管中，低速离心（一般 200g，2min），去上清， 更换为新鲜干净的培养基，轻轻混匀后放回培养容器中继续培养。后续可根据细胞状态，对 细胞再次适当换液，保持细胞正常生长状态。
4. 检测感染效率 感染细胞 48h-72h 后，在荧光显微镜下观察荧光蛋白表达，检测病毒感染效率。
注意：
a. 病毒感染时，建议与新鲜干净的培养基混匀后，再加入细胞培养体系。
b. 如需离心操作，请使用密封性好的离心管，或用 parafilm 膜封口后离心。另最好使用细胞培养室内的离心机进行离心操作， 避免病毒与外界环境的接触。
c. 观察病毒感染效果时，请拧紧培养瓶或盖好培养板，并用 70% 乙醇对培养瓶外壁进行消杀后，再在显微镜下观察；观察 完毕后，请用 70% 乙醇对显微镜实验台进行消杀。
