产品介绍

【产品描述】(Product Introduction)

        Fastlysis^TM RT Cell Lysis Kit是一款快速、高效地从细胞中一步获取RNA的试剂盒，适用于10-106个培养细胞的基因表达分析,快至5min完成RNA获取。本产品可直接在细胞培养板中完成基因组DNA清除和RNA获取，无需传统繁琐的提取流程，提高效率的同时减少纯化过程中的样品损失;且兼容广泛的细胞类型(贴壁或悬浮细胞)及细胞量，也可解决传统提取方式中低细胞数提取效果差的问题。本试剂盒可用于高通量(96/384孔板)细胞RNA的表达分析。

【产品组分】(Components) 

【保存条件】(Save Condition)

  Fastlysis^TM RT Cell Lysis Kit在-20℃可稳定保存12个月。

解冻后，在使用前彻底混匀。不建议反复冻融。为方便起见，可在2-8C保存1个月。

·自备材料(Materials)：

1xPBS缓冲液、RNase-free ddH₂0、RNase-free吸头、1.5mLRNase-free离心管、0.2 mL RNase-free 96孔PCR板/八联排/PCR管等。

【实验流程】(Protocol)：

Fig 1.

Fastlysis^TM  RT Cell Lysis Kit操作流程:

一、贴壁细胞(384/96/48/24/12/6孔板)，以96孔板为例 :

【配制裂解反应液】

1. 组分	体积
   FastlysisTM RT Cell Lysis	49ul
   gDNA Removal	1ul
   Total	50ul

   ** 裂解工作液按孔板所需体积现配现用,配制完毕，颠倒混匀,置于冰上备用。

     组分比例为Fastlysis^TM RT cell lysis :gDNA Removal=49:1

2. 待细胞培养至合适密度，轻轻吸除培养基；

3. 缓慢加入等量PBS洗涤一次，吸除PBS，移液操作尽量轻缓，避免损失细胞，同时尽量吸尽PBS；(根据实验安排，此操作步骤可省略);

4.每孔加入细胞裂解液50uL，轻轻吸打细胞6-8次，充分混，室温静置5min。根据不同孔板，建议每孔按照下表推荐体积加入裂解液

   
保存备用或-80℃长期保存，可直接用于后续实验，如逆转录、步法RT-qPCR等

** 裂解产物不宜超过最终反应体系10%，以免抑制逆转录反应

二、悬浮细胞(384/96/48/24/12/6孔板 )，以96孔板为例：

【配制裂解反应液】

裂解工作液按孔板所需体积现配现用,配制完毕，颠倒混匀,置于冰上备用组分比例为FastlysisTM RT Cell Lysis buffer:gDNA Removal=49:1

2.将悬浮细胞转移至离心管或96PCR板(<105细胞/管or孔)，4℃，1000xg离心2min，去除培养基;

3.用PBS重悬，4°C，1000xg离心2min，吸尽PBS；(根据实验安排，此操作步骤可省略)

4.每孔加入细胞裂解液50uL，轻轻吸打细胞6-8次，充分混室温静置5min.根据不同孔板，建议每孔按照下表推荐体积加入裂解液：

5.裂解产物放冰上保存备用，可直接用于后续实验，如逆转录、一步法RT-qPCR等

   如需长期保存，放置于-80℃可保存6个月。

** 裂解产物不宜超过最终反应体系10%，以免抑制逆转录反应

 【注意事项】

1.使用前请检查试剂中是否有结冰现象，如有组分结冰，可放置室温溶解混匀后方可使用。

2.裂解过程中如果细胞数目过多，可能导致裂解不完全或抑制后续的逆转录及gPCR反应，因此在操作前，贴壁细胞需根据板孔数选择对应体积的裂解工作液;悬浮细胞则需估算细胞数，选择对应体积的裂解工作液。

3.使用新鲜样本，若不能及时裂解，先将细胞用预冷的PBS洗涤1次后置于80°C保存，并避免反复冻融。

4.为了避免RNA的降解，细胞的处理与保存应尽可能迅速进行。用移液器轻轻吸打混匀，避免剧烈振荡产生气泡。

5.使用本试剂盒时，请穿戴实验服、一次性乳胶手套、一次性口罩、使用RNase-free耗材，避免RNase污染。

【常见问题与解决方案】

本品仅供科研使用,不得用于临床诊断。