产品介绍

来源：胶原蛋白酶 来源于溶组织梭菌

外观与性状：

棕色结晶粉末

包装规格：

100mg 1g  in glass bottle

产品简介：

胶原酶IV包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。胶原酶的使用浓度一般为0.1- 5 mg/ml，消化过程中可以搅拌以促进酶的消化。胶原酶在消化的过程中可以引起细胞的少量死亡，一般消化时间为15min至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。消化过程中首选的缓冲液为含钙离子和BSA的Krebs Ringer Buffer。在消化的过程中如果细胞大量死亡则需要降低酶量，同时可以加入0.5%BSA或5-10%血清来稳定细胞的状态和消化效果。
胶原酶的灭菌首先离心或者用0.8μm的滤器去掉不溶物。然后再用0.2μm的滤器过滤除菌。 盐酸苯甲脒和TLCK联合作用可以与该酶成分中大部分的蛋白酶结合而抑制其活性，但是他们却不会抑制胶原酶的活性。其中盐酸苯甲脒的浓度一般为1 mM，TLCK 的浓度一般为 0.100-0.135 mM。值得注意的是两者不能完全保证所有蛋白酶的活性均被抑制。
胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。

操作步骤：

溶液制备：
在TESCA缓冲液（含有50mM TES、0.36mM氯化钙，37℃时pH 7.4）中按1-2 mg/mL进行制备。反应体系的终浓度为50 mM TES，0.36 mM氯化钙，25 mg胶原，0.005-0.01 mg胶原酶。

稳定性：

酶液在含有0.3-0.5 mM 钙离子的中性pH条件下可以在37°C维持活性5小时。在-20°C可以维持数月。

酶活定义：

一个胶原蛋白消化单元（CDU）从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸，5小时，pH7.4,37℃，在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白，产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时，pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分钟水解1.0μmole BAEE。

保存条件：

-20℃

产品信息：