Anti-GFP Nanobody Agarose Beads

                                 
                                                                                           Anti-GFP Nanobody Agarose Beads

【产品介绍】

     GFP Beads是一种绿色荧光蛋白结合蛋白偶联的琼脂糖，能够高效特异地结合绿色荧光蛋白GFP，其结合效率可高达4微克/10微升，相比于直接运用GFP抗体和proteinA/G偶联的Beads，其效率要高很多。该Beads可运用于两个蛋白或者多个蛋白的互作分析（Co-IP），蛋白和DNA互作（DNA pull down或者CHIP），蛋白和RNA互作（RIP）还可以用作质谱分析以及酶活分析。

GFP beads产品不仅能够高效识别结合各种GFP,比如Egfp、ACGFP，wtGFP, GFP S65T，TagGFP等，还能识别CFP、YFP、BFP等荧光蛋白。产品结合效率非常高，比常规结合方式——抗体+beads的方式高出很多（如图一）。

【GFP Beads适应样品范围广】

      适用于组织，器官，细胞，植物材料，细菌，酵母，总之，有GFP蛋白的样品该beads都能够直接识别结合。

【使用该产品做Co-IP方法】

1. 轻轻上下颠倒GFP-beads，使得beads充分混匀，用剪过的枪头吸出所需体积量的beads至1.5ml的离心管中。一个样品大约30ul  beads。

2. 加入1ml washing buffer，轻轻上下颠倒清洗beads，然后800g，4℃离心5min，吸掉上清液。如此重复三遍。

3. 将转染后的细胞弃掉上清，用PBS清洗一遍，然后胰酶重悬（为重悬充分，加入胰酶后37℃孵育5min）。枪头轻轻重悬细胞转移至1.5ml离心管，800g离心5min，弃上清。

4. 利用以下lysis buffer裂解（10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA; 0.5% NP-40；1xcocktail）。枪头充分吹吸至细胞完全裂解，冰浴10min。

5. 高速离心后，将上清液吸出，加入30微升GFP-BEADS孵育，4℃垂直混匀2-3h（也可4℃过夜）。推荐30ul beads结合至少两个6cm皿细胞表达量的蛋白，在蛋白表达量低的情况下可多收集样本量保证样品饱和beads。

6. 800g，4℃离心5min，吸掉上清液，（可取一定量上清液作为对照），加入1ml预冷的washing buffer，上下颠倒清洗beads，然后800g，4℃离心5min。重复3-5遍。

7. 充分除去上清，加入30-50微升4x sample buffer，混匀后100℃煮10min。如需蛋白不变性或非变性则需50-100微升200毫摩尔PH2.5的甘氨酸溶液洗脱目的蛋白，可在4℃条件下垂直混匀10min，800g离心，将上清转移至新离心管，加入5-10微升中和buffer 1 M Tris pH 10.4 (四度下的PH）。

8. 13000rpm离心10min，上清液可用western blot鉴定。如果是质谱检测，wb后切胶酶解，纯化后上机检测。

【推荐washing buffer】  

10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA。

                                                                                                          （图一：产品使用结果图）

【质量保证】

     GFP Beads的每批产品实行严格质量检验，并进行多次反复实验验证，以确保产品质量。请用户使用前务必认真阅读本手册。

【使用限制】

     本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。

在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。